大客車不能在高速公路上行駛的時間是凌晨兩點(diǎn)至五點(diǎn)。 根據(jù)《道路旅客運(yùn)輸企業(yè)安全管理規(guī)范》四十五條規(guī)定，夜間上路行駛的客運(yùn)車輛必須在凌晨2點(diǎn)至5點(diǎn)之間停在附近的安全區(qū)域。同時，司機(jī)應(yīng)及時提醒車上乘客不要隨意走動。 根據(jù)《道路旅客運(yùn)輸企業(yè)安全管理規(guī)范》第三十八條 客運(yùn)企業(yè)在制定運(yùn)輸計(jì)劃時應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格遵守客運(yùn)駕駛員駕駛時間和休息時間等規(guī)定：1.日間連續(xù)駕駛時間不得超過4小時，夜間連續(xù)駕駛時間不得超過2小時，每次停車休息時間應(yīng)不少于20分鐘；2.在24小時內(nèi)累計(jì)駕駛時間不得超過8小時；3.任意連續(xù)7日內(nèi)累計(jì)駕駛時間不得超過44小時，期間有效落地休息；4.禁止在夜間駕駛客運(yùn)車輛通行達(dá)不到安全通行條件的三級及以下山區(qū)公路； 5.長途客運(yùn)車輛凌晨2時至5時停止運(yùn)行或?qū)嵭薪玉g運(yùn)輸；從事線路固定的機(jī)場、高鐵快線以及短途駁載且單程運(yùn)營里程（查成交價(jià)|參配|優(yōu)惠政策）在100公里以內(nèi)的客運(yùn)車輛，在確保安全的前提下，不受凌晨2時至5時通行限制；